У наркотизированных крыс-самцов линии Wistar (масса тела 350±15 г) изолированные сердца (масса сердца 1,8±0,1 г) подвергали действию тотальной ишемии (Pisarenko et al., 2010). До и после 35 минутной ишемии, сердца перфузировали нормотермическим раствором Krebs-Henseleit, насыщенным карбогеном (рН=7,4). Регистрировали ЧСС, аортальное и ЛЖ (левого желудочка) давление, коронарный поток и минутный объем ЛЖ. Группе животных до ишемии вводили 5 мг апелина-12 или его IV изоформу. Ранее было показано, что экзогенные С-концевые фрагменты апелина-12 способны ограничивать зону ишемического повреждения миокарда и улучшать восстанавление коронарной, сократительной и насосной функции сердца при тотальной глобальной ишемии. После ишемии и 30 минутной реперфузии сердца промывали 0,1 М фосфатным буфером и фиксировали в 4 % растворе параформальдегида в течение 3 суток при 4º C. Проводили материал в спиртах возрастающей концентрации и заливали в эпоксидную смолу аралдит как в публикации (Павлович, Просвирнин, 2011). Сердце разрезали на 4 кольца поперек его длинной оси. Второе и третье кольца от верхушки органа резали на кусочки, которые включали в себя свободную стенку правого или левого желудочков, миокард прилежащий к передней или задней межжелудочковым бороздам, а также участок межпредсердной и межжелудочковой перегородок в едином блоке. Дегидратированный материал сердца прицельно располагали в капсулах для заливки и полимеризовали в термостате. С оснований блоков на ультратоме фирмы ЛКБ получали 1 мкм срезы стенок сердца и окрашивали их толуидиновым синим. Просмотр срезов под микроскопом при увеличениях от 150 до 900 раз показал, что в стенке ЛЖ ишемизированного сердца наблюдали локальные изменения мышечных волокон, в которых происходила деструкция сократительного материала или выявлялись участки пересокращения оставшихся миофибрилл. Митохондрии и ядра в этих клетках выглядели мало измененными, но могли появляться вакуоли, особенно в пристеночных миоцитах. Иногда в части волокон были видны расхождения миоцитов по вставочным дискам. Часть стенки ЛЖ выглядела сохранной, и в миоцитах наблюдали поперечную исчерченность миофибрилл. В некоторых клетках была выявлена деструкция миофибрилл или наличие их контрактурных повреждений. Использование разных форм апелина уменьшало повреждения миофибрилл по сравнению с контролем, но часть измененных волокон в пределах стенки ЛЖ сердца сохранялась. Это соответствует биохимическим наблюдениям об уменьшении реперфузионного повреждения у крыс при применении апелина-12, который снижал маркеры некроза миоцитов (Pisarenko et al., 2012). В изолированных сердцах застойные изменения форменных элементов в кровеносных сосудах не были выявлены, в отличие от модели in vivo (Pavlovich et al., 2012). Для детализации изменений миокарда при тотальной ишемии и реперфузии сердца с использованием апелина необходимо проведение количественного анализа миоцитов ЛЖ, а также проведение ультраструктурного исследования материала всего сердца, в том числе, и его проводящей системы.
Библиографическая ссылка
Павлович Е.Р., Шульженко В.С., Просвирнин, А.В., Писаренко О.И. ИЗМЕНЕНИЕ СТРОЕНИЯ ИШЕМИЗИРОВАННОГО ЛЕВОГО ЖЕЛУДОЧКА ИЗОЛИРОВАННОГО СЕРДЦА КРЫСЫ ПОД ВЛИЯНИЕМ АПЕЛИНА // Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований. – 2014. – № 8-4. – С. 148-149;URL: https://applied-research.ru/ru/article/view?id=5735 (дата обращения: 17.04.2024).