Научный журнал
Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований

ISSN 1996-3955
ИФ РИНЦ = 0,618

ТЕЧЕНИЕ РАКА ОРГАНОВ ПОЛОСТИ РТА С УЧЕТОМ АССОЦИИРОВАНОСТИ С ВИРУСОМ ЭПШТЕЙННА-БАРР, ПАПИЛЛОМЫ ЧЕЛОВЕКА И УРОВНЯ НЕКОТОРЫХ ЦИТОКИНОВ

Светицкий П.В. 1 Златник Е.Ю. 1 Зыкова Т.А. 1 Нистратов Г.П. 1 Аединова И.В. 1 Волкова В.Л. 1 Баужадзе М.В. 1 Богомолова О.А. 1 Закора Г.И. 1
1 ФГБУ «Ростовский научно-исследовательский онкологический институт» Минздрава России
Проведенные исследования больных раком органов полости рта с регионарными метастазами и без них, показали 2–3 кратное превалирование IL-1, IL-6, IL-8, в ткани опухоли по сравнению с перитуморальной зоной (р < 0,05), которое может быть связано как с продукцией их опухолевыми клетками, так и наличием в ткани опухоли вирусов Эпштейна-Барр и папилломы человека. Достоверных различий между локальными уровнями цитокинов (IL-2, IL-8, IL-6, IL-10, IL-1β, IL1RА, IFN-α, IFN-γ, TNF-α) в группах больных с метастазами и без метастазов не было выявлено, это можно объяснить наличием неспецифической реакции на вирусы. У больных раком органов полости рта без метастазов было отмечено преобладание в тканях опухоли вируса папилломы человека (73,3 %) по сравнению с больными, имеющими регионарные метастазы, где преобладал вирус Эпштейна-Барр (70 %). Полученные лабораторные и клинические данные, позволили сделать вывод о благоприятном течении и прогнозе заболевания у ВПЧ-позитивных больных, по сравнению с ВЭБ-позитивными больными.
рак органов полости рта
регионарные метастазы
вирус папилломы человека
вирус Эпштейнна-Барр
цитокины
1. Айдарбекова А.А., Любаев В.Л., Ткачев С.И., Алиева С.Б., Бржезовский В.Ж. Эффективность химиолучевой терапии при регионарных метастазах у больных раком слизистой оболочки полости рта и ротоглотки // Вестник Российского онкологического научного центра имени Н.Н. Блохина РАМН: Ежеквартальный научно-практический журнал. – 2006. – T.17, № 1. – С. 7–10.
2. Бережная Н.М., Чехун В.М. Иммунология злокачественного роста / Киев: Наукова Думка, 2005. – 791 с.
3. Гутковская Е.А., Смолякова Р.М., Жуковец А.Г., Францкевич Т.В. Папилломовирусы человека и вирус Эпштейна-Барр при раке полости рта, ротоглотки и гортани: генетическая характеристика и частота выявления // Онкологический журнал. – 2012. – Т.6, №1 (21). – С. 71–74.
4. Каприн А.Д., Старинский В.В., Петрова Г.В. Злокачественные новообразования в России в 2012 году (заболеваемость и смертность) /Москва: ФГБУ «МНИОИ им. П.А. Герцена» Минздравсоцразвития России, 2014. – С. 11–53.
5. Матякин Е.Г., Неробеев А.Н. Пластика передних отделов дна полости рта и языка кожно-мышечными лоскутами использованием грудино-ключично-сосцевидной и трапециевидной мышцы // Современные принципы восстановительной хирургии лица и шеи. М., 1997. – С. 103–107.
6. Светицкий П.В. К вопросу о раке полости рта // Журн. «Опухоли головы и шеи». Изд. ООО «ИД «АБВ – пресс». – 2012. – № 4. – С. 59–62.
7. Чиссов В.И., Старинский В.В., Петрова Г.В. Злокачественные новообразования в России в 2008 году (заболеваемость и смертность) / Москва: ФГУ «МНИОИ им. П.А. Герцена Росмедтехнологий», 2010. – С. 54–59.
8. Arvin A., Campadelli-Fiume G., Mocarski E., et al. Human Herpesviruses: Biology, Therapy, and Immunoprophylaxis / – Cambridge: Cambridge University Press, 2007. – P. 987–1001.
9. Kruaysawat W., Aekplakorn W., Chapman R.S. Survival time and prognostic factors of oral cancer in Ubon Ratchathani Cancer Center// Journal of the Medical Association Thailand. – 2010. – Vol. 93. – № 3. – P. 278–284.
10. zurHausen H. Viruses in human cancer //European Journal of Cancer. – 1999. – Vol. 35. – P. 1878–1885.

В Российской Федерации в структуре заболеваемости опухолей головы и шеи рак органов полости рта и глотки занимает второе место после рака гортани [7]. Среднегодовой темп прироста данной патологии составляет 1,51 % [4], При первичном обращении до 70–80 % больных уже имеют распространенный рак полости рта и языка и метастазы в регионарные лимфатические узлы шеи [5]. Пятилетняя выживаемость, с учетом всех стадий, за последние десять лет не превышает 50 %. При этом, после лечения у 30–55 % развивается местный рецидив [9], а у 30–52 % появляются регионарные метастазы [1].

В Ростовской области (РО) в 2010 г. заболеваемость (на 100000 нас.) составила 7,9, что выдвинуло область на 4 место по данной патологии среди 84 регионов России [6].

Наибольшие сложности в плане диагностики и лечения представляют больные раком органов полости рта (РОПР). Остается проблематичным выяснение причин его возникновения, раннего выявления, изучения закономерностей течения заболевания, прогнозирования продолженного роста, рецидивирования и метастазирования.

В настоящее время, помимо общепризнанных факторов риска возникновения РОПР (алкоголь, курение и т.д.), большое внимание стало уделяться вирус-ассоциированному онкогенезу [10]. Установлено, что такие злокачественные новообразования как назофарингеальная карцинома, лейомиосаркома, лимфома Беркитта, назальная T/NK-клеточная лимфома и др., могут быть ассоциированы с вирусом Эпштейна-Барр (ВЭБ) [8]. Имеются сообщения, посвященные роли вируса папилломы человека (ВПЧ) в развитии и течении РОПР [3].

Интерес представляет оценка локального уровня некоторых цитокинов, поскольку воспалительный процесс вызывает их гиперпродукцию иммунокомпетентными клетками, и некоторые из них могут быть факторами роста и распространения опухоли [2].

Цель исследования. Определить в тканях опухоли локальный уровень цитокинов (IL-2, IL-8, IL-6, IL-10, IL-1β, IL1RА, IFN-α, IFN-γ, TNF-α), наличие вирусов Эпштейна – Барр и папилломы человека у больных раком органов полости рта, оценить особенности течения РОПР при наличии ВЭБ и ВПЧ.

Материалы и методы исследования

Объектом исследования были 60 больных РОПР, которые были разделены на 2 группы по 30 человек, первая группа с наличием регионарных метастазов, вторая – без метастазов, проходивших лечение в отделении опухолей головы и шеи ФГБУ «РНИОИ» МЗ РФ в 2012–2013 гг.

Мужчин было 48, женщин – 12. Возраст больных составлял 35–69 лет. По распространенности процесса: со II стадией (T2N0M0) было 12 еловек, III – 25 (T2N1M0 – 9, T3N0M0 – 18, T3N1M0 – 8), IV – 23 (T3N2M0 – 5, T4N0M0 – 10, T4N1M0 – 8).

У 50 (83,3 %) больных опухолевым процессом был поражен язык, у 10 (16,7 %) – слизистая дна полости рта. На языке опухоль располагалась чаще на боковой поверхности (53,3 %).

У всех больных был плоскоклеточный рак. Высокая степень дифференцировки (G1) имела место у 22 больных, средняя степень (G2) – 30 и низкая степень (G3) – 8.

Материалом для исследования служили фиксированные в формалине и парафине (FFPE ткани) и интраоперационно взятые образцы ткани опухоли и перитуморальной зоны.

Методом ELISA определяли локальные уровни интерлейкинов (IL-2, IL-8, IL-6, IL-10, IL-1β, IL1RА, IFN-α, IFN-γ, TNF-α) в гомогенатах фрагментов ткани опухоли и пограничной с опухолью, макроскопически неизмененной ткани, взятые интраоперационно. Рассчитывали удельное содержание цитокинов (пг/мл на 1 г белка).

Из FFPE ткани экстракцию вирусной ДНК проводили в ручном режиме методом сорбции на колонках с использованием набора реагентов «QIAamp DNA FFPE Tissue Kit» (QIAGEN, Германия).

Из гомогената ткани опухоли, взятой интраоперационно, ДНК вируса выделяли методом сорбции на магнитных частицах в автоматическом режиме на приборе MagNa Pure Compact с использованием набора реагентов MagNa Pure Compact Nucleic Acid Isolation Kit I-Large Volume на приборе MagNa Pure Compact (Roche, Швейцария). Амплификацию с последующей детекцией ДНК осуществляли методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме реального времени на термоциклере RotorGene 6000 (QIAGEN, Германия).

Выявление ДНК вируса ВЭБ, цитомегаловируса (ЦМВ), вируса герпеса человека 6 типа (ВГЧ) и вируса папилломы человека (ВПЧ) проводили методом мультиплексной ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией продуктов амплификации в режиме «реального времени» на термоциклере Rotor Gene 6000 (QIAGEN, Германия).

Для определения ДНК, генотипа (ВПЧ) и концентрации вируса в образцах использовали наборы реагентов производства ФБУН «ЦНИИ эпидемиологии» Роспотребнадзора.

Результаты исследования и их обсуждение

При изучении локальных уровней цитокинов (IL-2, IL-8, IL-6, IL-10, IL-1β, IL1RА, IFN-α, IFN-γ, TNF-α) были обнаружены достоверные различия по содержанию ряда провоспалительных цитокинов в ткани опухоли и перитуморальной зоне. Так, в ткани опухоли отмечено 2–3-х кратное преобладание IL-1 (14,4 ± 3,5 и 4,7 ± 0,74), IL-6 (5,7 ± 1,4 и 1,1 ± 0,3), IL-8 (16,2 ± 3,6 и 5,5 ± 2,1 пг/г белка), р < 0,05, по сравнению с перитуморальной зоной. Содержание TNF-α, IL-2, IL-10, IFN-α, IFN-γ в опухоли и прилежащей ткани не различалось. Достоверных различий между группами больных с метастазами и без метастазов не выявлено.

Превалирование в опухолевой ткани провоспалительных цитокинов может быть связано как с продукцией их опухолевыми клетками, так и иммунокомпетентными клетками, активированными антигенами.

Данные молекулярно-биологических исследований показали, что из 60 больных в тканях опухоли у 25 (41,7 %) встречался ВЭБ, у 23 (38,3 %) – ВПЧ, в то время, как в перитуморальной зоне содержание данных вирусов было в 2 и более раз меньше, либо они не были выявлены. У 12 больных (20 %) исследуемые вирусы отсутствовали в ткани опухоли и перитуморальной зоне.

В группе с метастазами у 14 больных из 30 был обнаружен ВЭБ, а у 2 – ВГЧ 6 типа, у 7 вирусы отсутствовали. В 7 случаях была выявлена микст инфекция: у одного больного ВПЧ, ВЭБ и ВГЧ 6 типа; у 3 – ВЭБ, ВГЧ 6 типа; у 2 – ВЭБ, ЦМВ; у одного – ВЭБ, ЦМВ и ВГЧ 6 типа (рис. 1).

sv1aa.tif

Рис. 1. Группа больных с метастазами

В группе без метастазов у 22 был выявлен ВПЧ. Сочетание вирусов встречалось у 4 больных: ВЭБ и ВПГ 1,2 типа. В 4 случаях вирусы отсутствовали (рис. 2).

sv2aa.tif

Рис. 2. Группа больных без метастазов

При анализе клинических данных в сопоставлении с полученными лабораторными было установлено, что у больных с регионарными метастазами ВЭБ встречался в 20 случаях (66,7 %), в то время как ВПЧ – в одном (3,3 %). У больных без метастазов ВЭБ был выявлен в 4 случаях (13,3 %) в сочетании с ВПГ 1,2 типа, в то время как ВПЧ – у 22 (73,3 %). Таким образом, у ВПЧ – позитивных больных, раком органов полости рта, метастазы встречались реже по сравнению с ВЭБ – позитивными (p < 0,05).

Заключение

1. Отмечено преобладание IL-1, IL-6, IL-8, в ткани опухоли по сравнению с перитуморальной зоной (р < 0,05), которое можно объяснить продукцией их опухолевыми клетками или наличием в ткани опухоли вирусов Эпштейна-Барр и папилломы человека, содержание которых в перитуморальной зоне было в 2 и более раз меньше, либо они не были выявлены; отсутствие достоверных различий между локальными уровнями цитокинов (IL-2, IL-8, IL-6, IL-10, IL-1β, IL1RА, IFN-α, IFN-γ, TNF-α) в группах больных с метастазами и без метастазов объясняется наличием неспецифической реакции на вирусы, присутствовавшие в тканях опухолей обеих групп.

2. Превалирование в группе больных РОПР без метастазов вируса папилломы человека (73,3 %) указывает на благоприятное течение и прогноз заболевания ВПЧ-позитивных больных, по сравнению с группой больных имеющих метастазы, в которой преобладает вирус Эпштейна-Барр (70 %).


Библиографическая ссылка

Светицкий П.В., Златник Е.Ю., Зыкова Т.А., Нистратов Г.П., Аединова И.В., Волкова В.Л., Баужадзе М.В., Богомолова О.А., Закора Г.И. ТЕЧЕНИЕ РАКА ОРГАНОВ ПОЛОСТИ РТА С УЧЕТОМ АССОЦИИРОВАНОСТИ С ВИРУСОМ ЭПШТЕЙННА-БАРР, ПАПИЛЛОМЫ ЧЕЛОВЕКА И УРОВНЯ НЕКОТОРЫХ ЦИТОКИНОВ // Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований. – 2014. – № 11-1. – С. 120-122;
URL: http://www.applied-research.ru/ru/article/view?id=6087 (дата обращения: 18.06.2018).

Предлагаем вашему вниманию журналы, издающиеся в издательстве «Академия Естествознания»
(Высокий импакт-фактор РИНЦ, тематика журналов охватывает все научные направления)

«Фундаментальные исследования» список ВАК ИФ РИНЦ = 1.252