Проведена оптимизация параметров синтеза гетероповерхностного сорбента (ГС) для высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) на основе немодифицированного кремнезёма. При использовании кремнезёмных матриц с диаметром пор менее 6 нм белковые компоненты введённых при хроматографировании проб практически не проникают внутрь пор и, следовательно, не сорбируются на внутренней поверхности сорбента, но внешняя поверхность доступна для адсорбции биополимеров пробы. Защита внешней поверхности глобулами альбумина при ультразвуковом воздействии с их последующей сшивкой позволяет предотвратить нежелательную адсорбцию и синтезировать ГС хорошего качества, пригодный для использования в ВЭЖХ с прямым вводом проб [1, 2]. Однако предварительная сшивка глобул человеческого сывороточного альбумина (ЧСА) по методике [2] приводит к образованию слоя олигомеров альбумина значительной толщины, затрудняющего диффузию низкомолекулярных компонентов проб внутрь пор сорбента. Было установлено, что исключение предварительной сшивки и проведение сорбции в течение от 30 до 120 минут из раствора ЧСА с концентрацией 4,5·10-4 моль/л в буферном растворе с pH, близким, но не равным pH изоэлектрической точке белка, существенно снижает толщину защитного слоя при сохранении его качества. Оптимальным является значение вблизи pH = 6,5, при котором глобула остаётся компактной, но, за счёт удаления от pI = 5,0, усиливается электростатическое отталкивание глобул ЧСА, что препятствует их агрегации в растворе.
Хроматографически подтверждена пригодность синтезированного сорбента для анализа лекарственных препаратов в биологических жидкостях методом прямого ввода проб, причём процент обнаружения белковой фракции на выходе из хроматографической колонки достигает 98%. Контроль толщины защитного слоя ЧСА проведён на основе данных элементного анализа.
Библиографическая ссылка
Богословский С.Ю., Сердан А.А. ОПТИМИЗАЦИЯ СИНТЕЗА ГЕТЕРОПОВЕРХНОСТНОГО СОРБЕНТА ДЛЯ ВЭЖХ НА ОСНОВЕ НЕМОДИФИЦИРОВАННОГО КРЕМНЕЗЁМА // Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований. – 2015. – № 7-1. – С. 160-160;URL: https://applied-research.ru/ru/article/view?id=6986 (дата обращения: 20.04.2024).