Scientific journal

International Journal of Applied and fundamental research

ISSN 1996-3955

ИФ РИНЦ = 0,593

Выраженная связь между вирусом Эпштейна-Барр (ВЭБ) и раком носоглотки (РНГ), обнаруженная в южных провинциях Китая, позволила впервые высказать предположение о принципиальной возможности использовать серологические маркеры вируса для диагностики этой ВЭБ-ассоциированной формы опухоли (нРНГ) [5]. В исследованиях, проведенных еще в 1978 г. Ho и др., было показано, что для диагностики нРНГ могут быть успешно использованы IgA антитела к вирусному капсидному антигену (ВКА) ВЭБ в титрах 1:10 и выше, причем даже в случаях предшествующих возникновению опухоли [6,7]. Несколько менее выраженной, но достаточной диагностической ценностью, обладали также IgG и IgA антитела к раннему антигену (РА) вируса [7].

Антитела к ВКА, относящиеся к иммуноглобулинам класса А, оказались полезными и для ранней диагностики нРНГ. Их высокая диагностическая ценность была продемонстрирована при массовом обследовании населения в одной из южных провинций Китая (Guangdong) [4]. Дальнейшие исследования показали, что кроме южных провинций Китая, высокие и промежуточные уровни заболеваемости РНГ зарегистрированы в странах Юго-Восточной Азии, Северной Африки, среди населения инуитов Аляски, Гренландии и Северной Канады, а также среди мигрантов китайского и филиппинского происхождения [8]. Вне эндемичных районов это новообразование встречается достаточно редко. Например, среди населения Колумбии, США, Финляндии, Зимбабве, Индии, и Японии показатели заболеваемости РНГ в период 1998-2002 годов были в 30-60 раз ниже, чем среди населения Гонконга, относящегося к региону высокого риска [9]. РНГ является редким заболеванием и среди населения стран бывшего СССР, включая Россию. В частности, в структуре злокачественных новообразований России в 2008 г. опухоли носоглотки у мужчин составляли 0,14, а у женщин 0,06 на 100 т. населения [2].

Согласно классификации Всемирной Организации Здравоохранения 2005 г. среди трех идентифицируемых гистологических вариантов РНГ (неороговевающий, ороговевающий и базалоидный плоскоклеточный рак) лишь неороговевающий рак (нРНГ), в подавляющем большинстве случаев регистрируемый в Южном Китае и странах Юго-Восточной Азии, тесно ассоциирован с ВЭБ [10].

В наших исследованиях, проводимых в не эндемичном регионе, России, диагностика нРНГ базируется на ранее разработанном нами так называемом «решающем правиле», в котором оцениваются значения титров IgG антител к ВКА и РА, а также IgA антител к ВКА вируса [1]. Любая положительная сумма диагностических весов, соответствующих выявленным у больного титрам ВЭБ-специфических антител, с достоверностью ≥ 95 % указывает на наличие нРНГ. Важно отметить, что среди титров антител трех указанных специфичностей, наибольший диагностический вес для диагностики нРНГ, как и в эндемичных регионах, обладают титры IgA антител к ВКА. Этот же класс антител к ВКА выявляют и с помощью иммуноферментных тест-систем различных коммерческих фирм. Значение же уровней IgA антител к ВКА, выявляемых иммуноферментным анализом, для диагностики нРНГ оставалось практически неизученным.

Цель исследования

Исходя из сказанного, цель данной работы состояла в оценке значимости 2-х серологических тестов, непрямой реакции иммунофлуоресценции (РИФ) и иммуноферментного анализа (ИФА), для диагностики нРНГ.

Материалы и методы исследования

Объектом исследования служили образцы плазмы крови 37 больных с морфологически подтвержденным диагнозом РНГ и 40 больных другими опухолями головы и шеи (ДОГШ), не ассоциированными с ВЭБ. В обеих группах больных наличие IgG и IgA антител к ВКА и РА антигенам были изучены с помощью двух тестов: непрямой реакцией иммунофлуоресценции (РИФ) и иммуноферментным анализом (ИФА). Условия проведения РИФ и учет получаемых результатов нами были описаны ранее [3], при этом титры ВЭБ-специфических антител в изучаемых группах представляли в виде их среднегеометрических значений (СГТ).

ИФА на IgG антитела проводили с помощью тест-системы производства ЗАО «Вектор-Бест» (Россия). Результат анализа считался положительным, если согласно инструкции производителя оптическая плотность образца (ОП обр.) была оптической плотности критического значения (ОП крит.). Результат анализа считался отрицательным, если ОП обр. < 0,8хОП крит. Результат анализа считался неопределенным, если 0,8 х ОП крит. ≤ ОП обр. < ОП крит.

ИФА на IgА антител осуществляли с помощью тест-системы EUROIMMUN (Германия), при этом значения <0.8 относились к негативным, от < 0.8 до < 1.1 – к неопределенным и >1.1 – к позитивным. Образцы плазмы крови от больных ДОГШ, использованные в качестве контрольных, тестировали в РИФ и ИФА с целью выяснения специфичности этих тестов для диагностики нРНГ. Анализ чувствительности и специфичности тестов определяли по следующим формулам: чувствительность = число истинно позитивных случаев/(число истинно позитивных случаев + число ложно негативных случаев); Специфичность = число истинно негативных случаев /(число истинно негативных случаев + число ложно позитивных случаев).

Результаты исследования и их обсуждение

Проведенные исследования показали (таблиц), что при тестировании в РИФ плазмы крови 37 больных с морфологически подтвержденным диагнозом нРНГ, IgG антитела к ВКА вируса были выявлены в 100,0 % случаев. Но специфичность теста составила всего лишь 10.0 %, т.к. в контрольной группе, состоящей из 40 больных ДОГШ, IgG антитела к ВКА обнаружены в 90 % случаев. ИФА при тестировании плазмы тех же больных нРНГ проявил схожую невысокую специфичность (17.5 %) при 100 % выявлении IgG антител к ВКА.

Более высокую диагностическую значимость РИФ и ИФА продемонстрировали при анализе содержания IgG антител к РА. Чувствительность РИФ при тестировании плазмы крови больных нРНГ на антитела указанной специфичности была равной 100 % (37/37), а его специфичность составила 82.5 %. При использовании ИФА чувствительность теста была несколько ниже (78.4 %), но его специфичность достигла 95.0 %. Полученные данные свидетельствуют о достаточно высокой диагностической для нРНГ ценности обоих тестов при тестировании IgG антител к РА и их непригодности при анализе IgG антител к ВКА.

IgA антитела к ВКА, как оказалось, представляют собой еще более специфический маркер для нРНГ, чем IgG антитела к РА. В РИФ эти антитела были выявлены у 35 из 37 больных нРНГ, (чувствительность 94.6 %) и их специфичность составила 90 %. Использование ИФА позволило обнаружить указанные антитела у 31 из 37 больных нРНГ (83.8 %) при их специфичности 97.5 %.

РИФ также продемонстрировала высокую для нРНГ диагностическую значимость при тестировании IgА антител к РА. Указанные антитела этим методом были выявлены у 34 из 37 больных нРНГ (91.9 %) и специфичность теста составила 95.0 %. IgА антитела к тому же антигену с помощью ИФА были обнаружены у 27 из 37 больных нРНГ (73 %) при также высокой специфичности иммуноферментного анализа (97.5 %).

Заключение

Таким образом, данные, полученные нами в не эндемичной по нРНГ России, находятся в соответствии с выводами зарубежных исследователей, изучавших проблему диагностики нРНГ в эндемичных регионах [6, 7]. В работах этих авторов диагностика нРНГ базировалась, преимущественно на обнаружении титров IgA антител к ВКА. Результаты проведенных нами исследований подтверждают высокую для диагностики нРНГ значимость IgA антител к ВКА, при использовании и РИФ, и ИФА. При этом чувствительность РИФ по сравнению с ИФА оказалась несколько выше (94.6 % против 83.8 %), в то время как ИФА демонстрировал несколько большую специфичность (97.5 % против 90.0 %). Изучение в РИФ и ИФА диагностической значимости IgA антител к РА также показало достаточно высокую диагностическую значимость этих тестов для нРНГ. При примерно одинаковой их специфичности (95.0 % и 97.5 % соответственно), более высокая чувствительность обнаружена у РИФ (91.9 % против 73.0 % соответственно). Преимущество РИФ перед ИФА, однако, состоит в отражении титрами антител, определяемыми в РИФ, вирусной нагрузки в организме больного нРНГ, как правило, совпадающей с динамикой опухолевого процесса, что наблюдалось нами в предыдущих исследованиях [1]. Показатели же ИФА не коррелировали с уровнями титров антител, а в ряде случаев имели противоположные значения: они иногда были низкими (1.6) при высоких титрах антител РИФ(1:160) и высокими (8.1) при низких титрах антител (1:40) (не показано). В заключение можно сделать вывод о том, что обе тест-системы обладают для нРНГвысокой чувствительностью и специфичностью при использовании в качестве маркеров нРНГ IgA антител к ВКА либо к РА. Эти тест-системы могут быть использованы и для диагностики нРНГ у больных с подозрением на эту опухоль при невыявленном первичном очаге. Кроме того, РИФ, может оказаться полезным тестом для мониторинга клинического состояния больных нРНГ.