В последние десятилетия были установлены факты размножения HCV в клетках лимфатических узлов, щитовидной, поджелудочной и слюнных желез, почек и надпочечников, селезенки, костного мозга, нейроглии сердца, мононуклеарах крови, эпителиальных клетках слизистой полости рта, кишечника и других органов [3, 5, 7, 8]. Эта особенность HCV лежит в основе широкого спектра патологии человека, связанной с этим вирусом.
На сегодняшний день описано около 40 наименований патологических состояний, охватывающих все другие органы и системы организма помимо печени, возникновение которых связывают с патогенетическим действием HCV [6, 9]. Полагают, что 70–74 % HCV – инфекции приходится на долю внепеченочных манифестации патологии [9] и лишь 25–30 % – на долю собственно гепатитов (острых и хронических), которых официально учитывают.
Это означает, что, во – первых, огромная масса больных не учитывается как лица с HCV – инфекцией, а они представляют реальную угрозу для окружающих как источник инфекции. Во – вторых, эпидемиологический надзор за HCV – инфекцией оказывается не эффективным. В – третьих, в результате реинфекции печени из основного очага HCV – печени может развиться хроническое поражение печени, которое по истечении времени может осложниться циррозом печени и гепатокарциномой. В – четвертых, использование антивирусной терапии может облегчить лечение основного заболевания у пациентов.
По – видимому, все сказанное обосновывает необходимость широкого обследования на HCV пациентов с внепеченочными проявлениями HCV – инфекции.
Материалы и методы исследования
Материалом для исследования служили сыворотки исследуемых больных с предполагаемой внепеченочной локализацией HCV – инфекции и здоровых лиц (контроль), которые собирали в профильных клиниках города и ряде частных клиник, а также в поликлиниках по трем районам города.
Сыворотки до исследования хранились при температуре минус18°С.
Сыворотки исследовали методом ИФА на наличие в них анти – HCV total с использованием диагностических и конфирмативных тест – наборов производства ЗАО «Вектор – Бест» (г.Новосибирск, Россия). Все исследования проводили в строгом соответствии с инструкцией фирмы – производителя. Учет реакции проводили на спектрофотометре «Текан « (Австрия).
Сыворотки, содержавшие анти – HCV total по результатам ИФА, далее исследовали методом ПЦР на наличие РНК – HCV. Для индикации РНК – HCV пользовались тест – набором для ПЦР – анализа ЗАО «Вектор – Бест» и комплектом оборудования для ПЦР фирмы «Bio Rad laboratories» (США). Постановка ПЦР и учет результатов проводили согласно инструкции ЗАО «Вектор – Бест».
Статистическую обработку результатов проводили по общепринятой методике [2].
Результаты исследования и их обсуждение
Результаты исследования сывороток больных и здоровых лиц на инфицированность HCV методом ИФА путем выявления анти – HCV total приведены в табл. 1.
Таблица 1
Выявление анти – HCV в сыворотках больных соматическими заболеваниями
|
Нозология заболевания |
Общее количество сывороток и сывороток позитивных по районам на анти – HCV (абс., M ± m %) |
||
|
Алмалинский |
Жетысуйский |
Турксибский |
|
|
Хронический панкреатит |
n=29; 3(10,3±5,64) |
n=24; 3(12,5±6,75) |
n=23; 4(17,3±7,88) |
|
Хронический гастрит |
n=33; 1(3,03±2,9) |
n=26; 0(0,0) |
n=25; 1(4,0 %) |
|
Сахарный диабет 2 типа |
n=30; 9(30,0±8,36) |
n=21; 6(28,5±9,05) |
n=23; 4(17,3±7,88) |
|
Хроническая обструктивная болезнь легких ХОБЛ |
n=22; 5(15,6±6,41) |
n=30; 3(10,0±5,47) |
n=26; 1(3,8 %) |
|
Апластическая анемия |
n=28; 3(10,7±5,84) |
n=19; 2(10,5±7,03) |
n=22; 3(13,6±7,30) |
|
Красный плоский лишай |
n=31; 5(16,1±6,60) |
n=16; 3(18,7±9,74) |
n=21; 4(19,0±8,56) |
|
Здоровые лица (контроль) |
n=29; 1(3,4 %) |
n=30; 2(6,6±4,53) |
n=25; 1(4,0 %) |
Как видно из табл. 1, выявляемость анти-HCV среди здоровых лиц составляла 3,4 – 6,6 % по районам. Среди больных хроническим панкреатитом она колебалась по районам г. Алматы от 10,3 % до 17,3 %, среди больных сахарным диабетом 2 – типа – от 17,3 % до 30 %, ХОБЛ – от 10 % до 15,6 %, апластической анемией – от 10,5 % до 13,6 % и красным плоским лишаем – от 16,1 % до 19,0 %. Эти показатели инфицированности исследуемых групп больных довольно значительно (3–4,5 раза) превышают инфицированность среди здоровых (контактных) лиц. Подобную распространенность HCV среди ряда соматических больных отмечают и другие исследователи [5]. Интересно, что среди больных хроническими гастритом выявляемость анти – HCV находится на уровне контрольной группы.
По-видимому, кислая среда содержимого желудка подавляет активность HCV.
В целом надо отметить, что наибольшая нагрузка по пораженности обследуемых больных HCV наблюдается в Алмалинском и Жетысуйском районах.
Однако при внепеченочной манифестации HCV – инфекции вирус обычно находится в фазе активной репликации, о чем может свидетельствовать обнаружение РНК – HCV у больного.
В связи с этим для выявления РНК – HCV сыворотки больных с одной нозологией болезни, позитивных в ИФА на анти – HCV и выявленных в исследуемых районах суммировали и исследовали в ПЦР (табл. 2).
Как видно, среди анти-HCV позитивных сывороток от исследуемых больных РНК – HCV выявлялась от 22,2 до 41,6 % случаев, свидетельствуя о размножении вируса в организм больного.
Таблица 2
Выявление РНК – HCV в сыворотках, позитивных на анти-HCV в ИФА
|
Нозология заболевания |
Количество анти – HCV позитивных сывороток по районам |
Количество сывороток |
Выявлено РНК – HCV (абс., M ± m %) |
||
|
Алмалинский |
Жетысуйский |
Турксибский |
|||
|
Хронический панкреатит |
3 |
3 |
4 |
10 |
3 (30±14,49) |
|
Хронический гастрит |
1 |
0 |
1 |
2 |
0 |
|
Сахарный диабет 2 типа |
9 |
6 |
4 |
19 |
6(31,5±10,65) |
|
ХОБЛ |
5 |
3 |
1 |
9 |
2(22,2±13,85) |
|
Апластическая анемия |
3 |
2 |
3 |
8 |
2(25±15,30) |
|
Красный плоский лишай |
5 |
3 |
4 |
12 |
5(41,6±14,22) |
|
Здоровые лица (контроль) |
1 |
2 |
1 |
4 |
0 |
В научной литературе также имеются указания на патогенетическую роль HCV в развитии тех или иных болезней внепеченочной локализации [1, 5].
Ранее было показано, что в юго-восточном регионе Казахстана среди больных гепатитом С распространенность 1-го генотипа HCV составляет 45,6 %, 2-го – 12,2 %, 3-го – 17,7 %, 4-го – 0,7 %. Смешанные генотипы выявлялись в 8,5 % и в 15 % не удавалось определить генотип HCV [4].
Далее мы попытались определить гено – и субтипы HCV, выявленного в изучаемых сыворотках больных (табл. 3).
Таблица 3
Определение гено- и субтипов HCV в сыворотках больных
|
Нозология заболевания |
Количество РНК – HCV + сывороток |
Выявленные гено- и субтипы HCV (абс., M ± m %) |
||||
|
1a |
1b |
2a |
2b |
3a |
||
|
Хр. панкреатит |
10 |
3/4 |
4(40±15,5) |
3/4 |
3/4 |
3(30±14,5) |
|
Сахарный диабет 2 типа |
19 |
1(5,2) |
3/4 |
2(10,4±7,0) |
3/4 |
8(42,1±11,3) |
|
Апластическая анемия |
8 |
1(12,3) |
3(37,5±17,3) |
3/4 |
3/4 |
2(25±15,3) |
|
ХОБЛ |
9 |
1(11,1) |
3(33,3±15,7) |
3/4 |
2(22,2±13,8) |
3/4 |
|
Красный плоский лишай |
12 |
- |
7(58,3±14,2) |
2(16,6±10,7) |
2(16,6±10,7) |
- |
Как видно, среди больных хроническим панкреатитом выявлялись гено – и субтипы 16 (40 %) и 3a(30 %). Среди больных сахарным диабетом обнаруживался в основном 3a(40 %), при апластической анемии – 1b(37,5 %) и 3a(25 %). При ХОБЛ у больных преобладал 1b генотип (33,3 %) и в 22,2 % случаев определялся 2b генотип. Среди больных красным плоским лишаем в 58 % случаев выявлялся 1b гено – и субтип HCV.
К сожалению, связать развитие того или иного заболевания с конкретным гено – и субтипом HCV не представляется возможным. Можно лишь предположить, что те гено – и субтипы HCV, которые чаще определяются у больных с конкретной нозологией болезни, имеют предпочтительное преимущество к размножению в данном органе (органотропизм).
Таким образом, наши исследования показали, что среди соматических больных различной нозологии анти – HCV выявляются в 3 – 4,5 раза чаще, чем среди здоровых лиц. Среди анти – HCV позитивных исследуемых больных частота выявления РНК – HCV колебалась от 22,2 до 41,6 %. Обнаруженные HCV относились к генотипам 1, 2, 3 и к субтипам 1a, 1b, 2a, 2b и 3a. Наиболее распространенными среди исследуемых больных оказались субтипы 1b (33–58 %) и 3a (25–42 %).