Последние годы ознаменовались значительным повышением интереса к мукозальному эпителию, который занимает координирующие позиции в реакциях стыкующих механизмы иммунитета, инициации и стабилизации воспалительных процессов. Буккальный эпителий, который является частью мукозальной системы используют в качестве индикатора местных и общих нарушений гомеостаза [3, 4, 9]. Цитодиагностика по мазкам из полости рта имеет большое значение для изучения ее локальной патологии и заболеваний пищеварительной системы Она используется для оптимизации диагностики социально значимых заболеваний[6]. Функциональная активность буккальных клеток зависит от степени их зрелости: от малодифференцированных предшественников в базальном слое, до высокоспециализированных клеток, которые находятся в поверхностных слоях [1, 2]. В этой связи изучение цитограмм буккального эпителия может служить источником важной диагностической и прогностической информации при аномалиях строения зубочелюстной системы, которые встречаются у 40–60 % детей [5, 7, 8]. Задачей работы явился сравнительный анализ цитограмм буккального эпителия у подростков в норме и с аномалиями зубочелюстной системы.
Материалы и методы исследования
Обследовано 67 подростков в возрасте 12-16 лет, из них 24 здоровых (1 группа) и 33 с аномалиями развития зубочелюстной системы. Из них 15 – имели аномалии положения отдельных зубов, 10 – аномалии зубных рядов в трансверсальном, сагиттальном или вертикальном направлении, 8 – аномалии прикуса.
Материалом для исследования служили мазки со слизистой оболочки максиллярной зоны щеки, выше линии смыкания зубов, на уровне 5–6 зуба. Мазки брали пластмассовым шпателем, переносили на предметные стекла, подсушивали, фиксировали, окрашивали по Папенгейму. В мазках при микроскопировании с увеличением 400 подсчитывали из расчета на 1000 клеток эпителиальные клетки различных стадий дифференцировки, в том числе инфильтрированные микроорганизмами, дистрофически измененные и «фагирующие» эпителиоциты, кроме того, выявлялись моноциты, нейтрофилы, лимфоциты и голоядерные клетки. Выделяют шесть стадий дифференцировки эпителиоцитов: базальные, парабазальные, 3-го и 4-го типов, находящиеся в шиповатом слое, поверхностные или клетки 5-ой стадии дифференцировки и роговые чешуйки.
По процентному соотношению компонентов цитограмм высчитывался ряд интегральных показателей: ИДиф, ИЛС,ВДИ,ИД, ИМЭК. Индекс дифференцировки клеток (ИДиф) используется для изучения процессов пролиферации и дифференцировки в слизистой оболочки полости рта. Индекс левого сдвига (ИЛС) применяют для выявления омоложения клеточного состава эпителия в слизистой. Интегральным показателем воспаления является воспалительно-деструктивный индекс ВДИ. Для исследования сохранения межклеточных связей применяют индекс многоклеточных эпителиальных комплексов.
Статистический анализ полученных данных проводили с помощью пакета статистических программ StatSoft «Statistica», методами вариационной статистики с помощью критерия Стьюдента.
Результаты исследований и их обсуждение
В мазках детей 1 группы клетки II стадии дифференцировки отсутствовали, у детей 2 группы – составили 1,3 ± 0,11 %. Они имели округлую форму, базофильную цитоплазму, крупное темно-фиолетовое ядро. Клетки III стадии дифференцировки (1,8 ± 0,10 %; 3,9 ± 0,61 %, соответственно группам, p < 0,01) имели овальную форму и умеренно базофильную цитоплазму, ядра клеток были с хорошо выраженным рисунком хроматина, который носил нежно-сетчатый характер. Эпителиоциты IV стадии (20,3 ± 0,50 %; 20,7 ± 0,58 %, соответственно группам) характеризовались полигональной формой и слабобазофильной цитоплазмой. В них, по сравнению с предыдущей стадией, ядра клеток уменьшались в размерах, структура ядра была более грубая, в нем встречались интенсивно окрашенные комки хроматина. Число клеток V стадии превалировало в цитограммах (70,0 ± 0,70 %; 64,0 ± 0,39 %, соответственно группам, p < 0,01). Цитоплазма в них имела нечеткие границы, иногда образовывала широкие выросты. Ядра поверхностных клеток приобретали неправильную форму, уменьшались в размерах. В них наблюдались процессы сморщивания, хроматин терял рисунок и интенсивно прокрашивался. С повышением степени кератинизации поверхностные клетки превращались в безъядерные (5,4 ± 0,20 %; 5,4 ± 0,49 %, соответственно группам). Они имели неправильную форму, цитоплазма окрашивалась в серый цвет. Индекс дифференцировки эпителиоцитов в 1 группе составил 462,2 ± 1,31. Во 2 группе он был равен 447,7 ± 5,7 (p < 0,05). Среди неэпителиального компонента цитограммы встречались единичные нейтрофилы, лимфоциты, моноциты и голоядерные клетки.
Таким образом, исследование цитограмм показывает, что в группе детей с аномалиями зубочелюстной системы имело место омоложение клеточного пласта буккального эпителия. Об этом свидетельствовало появление парабазальных эпителиоцитов, увеличение числа клеток III стадии дифференцировки и снижение процентного содержания клеток V стадии дифференцировки, а так же снижение индекса дифференцировки. Мы считаем, что эти сдвиги в цитограммах детей 2 группы были связаны с наличием у ряда из них воспалительных изменений в тканях десны и парадонта. В этой связи материал 2 группы был разбит на две подгруппы. Одну составили пациенты из 23 детей без воспалительных изменений в тканях пародонта и слизистой ротовой полости. Гигиенический индекс указывал на удовлетворительное состояние гигиены полости рта и был равен 1,3.Проба Шиллера-Писарева была отрицательна. Вторую группу составили 10 подростков с явлениями катарального гингивита и локального пародонтита. Маргинальная часть десны и межзубные сосочки были отечны и слабо гиперемированы. При надавливании на основания сосочков наблюдалась кровоточивость из их вершин. Проба Шиллера-Писарева была положительна. Папилярно-маргинальный индекс был равен 30 %. Гигиенический индекс был равен 1,6.
У подростков с аномалиями зубочелюстной системы, осложнившимися катаральным гингивитом и локальным пародонтитом, мазок отличался значительной клеточностью. Фон мазка был мутным, базофильным. В мазках появлялись клетки II стадии дифференцировки, повышалось содержание клеток III стадии, наблюдалось снижение содержания эпителиоцитов IV и V стадий. Количество безъядерных элементов было минимальным (рисунок). Выявлялись многоклеточные (от 10 клеток и более) эпителиальные комплексы, что свидетельствовало об увеличении степени десквамации эпителия.
Цитограмма буккального эпителия у подростков с аномалиями зубочелюстной системы, осложнившимися воспалительными изменениями в пародонте
В цитограмме резко возрастал неэпителиальный компонент, часть из которого была разрушена Содержание нейтрофильных гранулоцитов (N), лимфоцитов (L), макрофагов (M), голоядерных клеток(GM) увеличивалось. Определялось немалое количество клеток с бактериальной обсемененностью кокками, что отражало изменения местного микробиоценоза. Встречались эпителиоциты с мелкокапельной гидропической дистрофией. Наблюдалось проникновение лейкоцитов в эпителиоциты («фагирующие» клетки). Анализ индексов реактивных свойств буккального эпителия показал, что значительно снижался индекс дифференцировки (455,1 ± 2,30; 407,8 ± 3,30; р < 0,001). Появлялись индексы левого сдвига (2,2 ± 0,09) и многоклеточных эпителиальных комплексов (4,4 ± 0,16), возрастали индексы деструкции (с 2,2 ± 0,13 до 4,8 ± 0,14) и воспалительно-деструктивный (с 1,2 ± 0,03 до 4,4 ± 0,16). Разница статистически достоверна (р < 0,001).
Заключение
Сравнительный анализ цитограмм мукозального эпителия полости рта показал, что в у 30 % детей с аномалиями зубочелюстной системы происходит омоложение клеточного пласта буккального эпителия в виде появления в цитограмме парабазальных эпителиоцитов, увеличение числа клеток III стадии дифференцировки и снижение процентного содержания клеток V стадии дифференцировки. У подростков с аномалиями зубочелюстной системы, осложнившимися катаральным гингивитом и локальным пародонтитом в мукозальном эпителии значительно снижался индекс дифференцировки появлялись индексы левого сдвига и многоклеточных эпителиальных комплексов, а также возрастали индекс деструкции и воспалительно-деструктивный индекс