Развитие дисбиоза различных биотопов макроорганизма имеет много причин, в том числе злокачественные новообразования, среди которых на долю гемобластозов приходится до 100 %. Дисбиоз у больных гемобластозами является состоянием, часто возникающим еще до начала противоопухолевой химиотерапии, принимая во внимание вовлечение в патологический процесс основных эффекторных клеток в противомикробной защите организма [2, 4]. Для профилактики и коррекции его на практике продолжают применяться пробиотические препараты, содержащие представителей резидентной микрофлоры, прежде всего лакто- и бифидобактерии. Однако для прогноза эффективности их использования рекомендуется определение способности пробиотического штамма к сосуществованию с представителями собственной микрофлоры пациента [1].
Цель исследования – оценка биосовместимости пробиотического и клинических штаммов лактобактерий, выделенных из фекалий больных гемобластозами.
Материалы и методы исследования
Клинические штаммы лактобактерий выделены из фекалий 11 больных гемобластозами (10 из них получены от больных хроническими лейкозами и один штамм от больного лимфогранулематозом). Культуру пробиотического штамма выделяли посевом десятикратного разведения (в физиологическом растворе хлорида натрия) лиофилизированного препарата «Лактобактерин», культуры лактобактерий пациентов – путем мерного посева (0,1 мл) разведений фекалий 10-2-10-5на лактоагар в чашках Петри. Посевы инкубировали при 37 °С в микроэрофильных условиях в течение 48 часов. К лактобактериям относили грамположительные не имеющие спор неподвижные каталазоотрицательные палочки, образующие на 2 сутки после посева мелкие беспигментные выпуклые колонии правильной формы, принимая во внимание также источник выделения. Биосовместимость штаммов определяли методом совместного культивирования на поверхности твердой питательной среды: на основе двухсуточных агаровых культур готовили суспензии в стерильном физиологическом растворе хлорида натрия соответственно стандарту мутности ГИСК им. Л.А. Тарасевича на 10 ед (109 КОЕ/мл) и с помощью мерной петли наносили их на лактоагар (в начале – пробиотический штамм, а затем, после впитывания капли, отступя на 1-2мм – штамм, выделенный от больного)[3]. Таким образом, на одной средеполучали 12 пар частично (на 1/3) перекрывающихся капель испытуемых культур (11 пар, образованных пробиотическим штаммом и штаммом от больного, и 1 пару из 2 капель пробиотического штамма в качестве контроля). Для достоверности посевы дублировали. После впитывания капель чашки инкубировали вверх дном при 37 °С, результаты учитывали через 48часов. При наличии антагонизма между штаммами отмечали образование четкой границы роста культур в месте контакта с выходом одной из них наверх, при отсутствии антагонизма – слияние растущих культур. Статистическую обработку для качественного характера признака проводили, рассчитывая относительную долю (p) штаммов, проявивших антагонистическую активность, ее среднее квадратичное отклонение (δp) и статистическую ошибку(sp)[5].
Результаты исследования и их обсуждение
Установлено, что 4 штамма из 11 (три от больных хроническим лейкозом и один от больной с лимфогранулематозом) были несовместимы с пробиотическим согласно результатам совместного культивирования. Этому соответствуютзначения p 0,36 (36 %) и 0,64 (64 %), δp 0,48 (48 %) и sp 0,14 (14 %). При этом количество лактобактерий у двух больных соответствовало норме (107 КОЕ/г фекалий), а у остальных было умеренно снижено (105КОЕ/г).
Заключение
Таким образом, перед коррекцией дисбиоза кишечника у онкогематологических больных необходимо определение биосовместимости выбранного пробиотического штамма и представителями собственной лактофлоры пациентов.