Лизоцим или N-ацетилмурамидаза является ферментом, разрывающим 1-4 -глико- зидную связь между N-ацетилгюкозамином и N-ацетилмураминовой кислотой в молекуле пептидогликана клеточной стенки бактерий, в результате чего происходит лизис бактерий.
Роль лизоцима в защите макроорганизма от инфекции общеизвестна. Антилизоцимная активность является одним из факторов, повышающих толерантность бактерий к действию сывороточного лизоцима человека и животных. Способность патогенных и условно-патогенных бактерий к длительному выживанию в организме хозяина называется персистенция.
Некоторые авторы полагают [2], что антилизоцимная активность способствует длительной выживаемости бактерий в макроорганизме и может быть использована в условиях баклабораторий для оценки этиологической роли выделенных культур. Свойство бактерий специфически инактивировать лизоцим хозяина, которое определяется как антилизоцимная активность, широко встречается у бактерий, относящихся к семейству Enterobacteriaceae у стафилококков и др.
Материалы и методы исследования
Изучение антилизоцимной активности проводили по методу О.В. Бухарина (1984) [3]. Для определения антилизоцимной активности на физиологическом растворе готовили ряд разведений лизоцима из яичного белка (Олайнский завод химреактивов) в концентрациях (2, 3, 4, 5, 10, 20, 30, 40, 50 мкг/мл). 0,5 мл каждого разведения лизоцима смешивали с 4,5 мг расплавленного и остуженного до 45 °С 1,5 % питательного агара и выливали в чашки Петри. На агар с лизоцимом наносили стандартной петлей капли суточных культур исследуемых штаммов. Посевы инкубировали 18-24 ч. при 37 °С, затем исследуемые культуры выросшие в макроколониях убивали парами хлороформа в течение 10 минут.
После этого макроколонии заливали вторым слоем 3 мл 0,7 % агаровой питательной среды смешанной с 0,1 мл бактериальной взвеси суточной агаровой индикаторной культуры Micrococcus luteus (АТСС № 29470, ГНИИСК им. Л.А. Тарасевича) с мутностью 4 по Мак Фарланду и ставили в термостат при 37 °С на сутки.
Тест считался положительным при росте индикаторного штамма Micrococcus luteus вокруг колоний тех штаммов, которые нейтрализовали внесенный в слой агара яичный лизоцим.
В работе исследованы на наличие антилизоцимной активности 190 культур Eschrtichia coli, 124 культуры Enterobacter cloacae, 29 культур Serratia marcescens, 74 культуры Morganella morganii, 51 культура Citrobacter freundii, выделенные от овец на территории Чеченской Республики [1, 4, 5, 6, 7, 8, 9].
Результаты исследования и их обсуждение
Результаты проведенных исследований представлены в таблице.
Распространение антилизоцимной активности у представителей разных родов семейства Enterobacteriaceae
|
Вид микроорганизма |
Число исследованных штаммов |
Число штаммов с антилизоцимной активностью |
Процент штаммов с антилизоцимной активностью (X ± m) |
|
Eschrtichia coli |
190 |
100 |
52,6 ± 11,4 |
|
Enterobacter cloacae |
124 |
54 |
43,5 ± 1,8 |
|
Serratia marcescens |
29 |
25 |
86,2 ± 7,7 |
|
Morganella morganii |
74 |
44 |
59,5 ± 9,3 |
|
Citrobacter freundii |
51 |
31 |
60,8 ± 10,4 |
Как видно, из данных представленных в таблице, наибольшее количество культур, обладающих антилизоцимной активностью, были выявлены среди Serratia marcescens (86,2 ± 7,7 %), а меньше всего этот признак встречался у представителей вида Enterobacter cloacae (43,5 ± 1,8 %). Среди 190 исследованных культур эшерихий у 100 штаммов была отмечена способность продуцировать антилизоцим, что составляет 52,6 ± 11,4 %. Этот фактор патогенности присущ так же 44 из 74 испытанных культур морганелл (59,46 %). Из 51 исследованных культур цитробактерий 31 штамма (60,8 ± 10,4 %) продуцировали антилизоцим.
Заключение
Таким образом, как видно из таблицы антилизоцимная активность это широко распространенное свойство среди исследованных бактерий родов Eschrtichia, Enterobacter, Serratia, Morganella, Citrobacter.